检测范围
- GAL4转录因子型酵母双杂交系统
- LexA操纵子型酵母双杂交系统
- Dual Bait双诱饵酵母双杂交系统
- _split-泛素酵母双杂交系统
- 膜蛋白酵母双杂交系统
- 细菌双杂交对照验证系统组件
- cDNA表达文库筛选型酵母双杂交系统
- 随机多肽文库筛选系统
- pGBKT7-pGADT7载体对系统
- pBT-pTRG载体对系统
- AH109酵母报告菌株配套系统
- Y2HGold酵母报告菌株配套系统
- NMY51膜蛋白互作检测系统
- 诱饵蛋白表达载体构建组件
- 猎物蛋白cDNA文库构建组件
- 三重报告筛选系统
- 四重报告筛选系统
- 酵母双杂交定量检测系统
- 酵母共转化检测系统
- mate-and-match酵母接合型筛选系统
- 阴性对照与阳性对照互作验证组件
- 酵母双杂交试剂盒成套检测产品
检测标准（部分）
- GB/T 46454-2025 临床实验室检测和体外诊断系统 感染性疾病相关酵母样真菌抗微生物药物的体外活性检测微量肉汤稀释参考方法
- YY/T 1728-2021 临床实验室检测和体外诊断系统 感染性疾病相关酵母样真菌抗菌剂的体外活性检测参考方法
- DB53/T 1073-2021 甘蔗杂交育种独立亲本系统的创制及培育技术规程
- ISO 16256:2021 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems — Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases
- DIN EN ISO 16256:2022-02 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases (ISO 16256:2021)
- KS P ISO 16256-2017 임상검사실 검사 및 체외진단용 의료기기 ─ 감염성 진균감염에서의 항진균제 감수성 검사의 참조(기준)방법
- BS EN ISO 16256:2021 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems. Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases
- T/SHDSGY 230-2022 基于Web的Server-Client架构复杂交互系统编程核心技术规范
- EN ISO 16256:2021 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases (ISO 16256:2021)
- ГОСТ Р ИСО 16256-2015 Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Референтный метод для тестирования активности in vitro антимикробных препаратов в отношении дрожжевых грибов, вызывающих инфекционные заболевания
- BS 11/30237471 DC BS EN ISO 16256. Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems. Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast of fungi involved in infectious diseases
- ISO 16256:2012 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems — Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases
- KS P ISO 16256 임상검사 실 검사 및 체외진단 검사 시스템 감염성 효모 형 진 균에 대한 항균제 액체배지 미량희석 감수성 검사의 참조 참조(기준기준)방법
- KS P ISO 16256-2022 임상검사 실 검사 및 체외진단 검사 시스템 감염성 효모 형 진 균에 대한 항균제 액체배지 미량희석 감수성 검사의 참조 참조(기준기준)방법
- DIN EN ISO 16256:2013-04 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast of fungi involved in infectious diseases (ISO 16256:2012)
- BS EN ISO 16256:2012 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems. Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast of fungi involved in infectious diseases
- EN ISO 16256:2012 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast of fungi involved in infectious diseases (ISO 16256:2012)
- DIN EN ISO 16256:2021-03 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases (ISO/DIS 16256:2021); German and English version prEN ISO 16256:2021
常见问题
酵母双杂交系统检测需要多长时间？
通常7-15个工作日。载体测序与质粒质检约3-5个工作日，自激活与毒性检测约5个工作日，文库筛选及阳性克隆验证因文库规模不同可能需要10-15个工作日。
酵母双杂交系统检测费用大概多少？
根据检测项目数量确定。单项载体测序验证费用较低，包含自激活检测、毒性评估、文库筛选与阳性克隆回复验证的成套检测方案费用会相应增加，具体以检测方案确认后的报价为准。
酵母双杂交出现假阳性结果怎么办？h3>
建议通过回复验证实验排除假阳性，即将回收的猎物质粒与诱饵载体重新共转化验证互作是否重现，同时配合阴性对照诱饵检测互作特异性，必要时采用免疫共沉淀等体外方法进行交叉确认。
检测信息
酵母双杂交系统是一种在酵母细胞内研究蛋白质-蛋白质相互作用的分子生物学技术平台，主要用于筛选未知互作蛋白、验证已知蛋白间的相互作用以及绘制蛋白互作图谱，广泛应用于药物靶点发现、信号通路研究和抗体开发等领域。对该系统的检测服务覆盖系统组件质量验证、载体构建正确性确认、诱饵蛋白自激活与毒性评估、文库筛选效率评价等内容。
检测目的在于确认酵母双杂交系统的灵敏度、特异性和可重复性是否满足实验要求，涉及的技术手段包括核酸电泳、测序、菌落PCR、转化效率测定、报告表达定量分析以及选择性培养基生长验证等。
检测流程一般包括样品接收与核对、载体抽提质检、测序比对确认插入片段、酵母转化与表达验证、互作信号读出与数据分析等环节，核心参数涵盖转化效率、自激活背景、互作信号强度比和文库容量等指标。
检测项目
- 载体插入片段测序验证，确认诱饵或猎物序列与读码框的正确性
- 质粒浓度与纯度测定，评估A260/A280比值是否符合转化实验要求
- 菌落PCR鉴定，确认转化子中目的的存在与片段大小
- 诱饵蛋白自激活检测，判定诱饵是否在无互作情况下激活报告
- 诱饵蛋白毒性检测，评估诱饵表达对酵母菌株生长速率的影响
- 诱饵蛋白表达量检测，确认融合蛋白在酵母中的可检测表达水平
- 酵母转化效率测定，反映感受态细胞质量与操作体系的可靠性
- 报告活性测定，通过β-半乳糖苷酶或荧光素酶定量互作信号强度
- 营养缺陷型筛选验证，检测His3、Ade2等标记在筛选培养基上的表达
- 文库容量与滴度测定，评价cDNA文库的克隆多样性与代表性
- 文库插入片段长度分布分析，判断文库构建质量是否符合筛选需求
- 阳性对照互作验证，确认系统对已知互作蛋白的检出能力
- 阴性对照背景检测，评价系统假阳性信号的背景水平
- 互作特异性检测，通过竞争性实验排除非特异性结合
- 共转化效率检测，评估双载体在同一个酵母细胞中的共转化成功率
- 选择性培养基生长曲线测定，反映互作克隆在筛选压力下的增殖能力
- 互作信号强度比分析，以倍数变化判定互作的显著性与可信度
- 假阳性率评估，通过回复验证统计非真实互作所占比例
- 回补验证，对初筛阳性克隆进行测序与同源比对确认
- 菌株型鉴定，确认报告菌株的标记与接合型保持稳定
检测方法
- 琼脂糖凝胶电泳法，用于载体酶切图谱分析与插入片段大小确认
- Sanger测序法，对插入片段进行序列测定与读码框比对
- 菌落PCR法，快速鉴定转化克隆中目的的存在情况
- 氯化锂转化法，将载体导入酵母菌株并计算转化效率
- 醋酸锂PEG转化法，用于酵母感受态细胞的高效共转化
- β-半乳糖苷酶滤膜显色法，定性检测LacZ报告的激活状态
- ONPG液体显色定量法，定量测定β-半乳糖苷酶活性反映互作强度
- 荧光素酶报告法，通过化学发光信号定量互作程度
- 梯度稀释点板法，评估菌株在缺失培养基上的生长表型与自激活水平
- 液体培养生长曲线法，监测诱饵蛋白对酵母生长的毒性影响
- 酵母接合实验法，通过接合型菌株配对实现文库筛选
- Western印迹法，检测融合蛋白在酵母中的表达水平与完整性
- 质粒 rescued提取回转法，从阳性克隆中回收猎物质粒进行回复验证
总结
酵母双杂交系统检测是对该蛋白互作研究平台的载体质量、菌株性能、自激活背景、转化效率与筛选灵敏度等指标进行的全面技术评价。
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