免疫荧光检测

检测范围

• 直接免疫荧光法检测组织切片样本
• 间接免疫荧光法检测细胞涂片样本
• 荧光抗体技术检测病原微生物
• 细胞膜表面抗原免疫荧光检测
• 细胞核抗原免疫荧光检测
• 细胞质抗原免疫荧光检测
• 冰冻切片免疫荧光染色检测
• 石蜡切片免疫荧光染色检测
• 全组织免疫荧光检测
• 活细胞免疫荧光动态检测
• 双重免疫荧光染色检测
• 多重免疫荧光染色检测
• 自身免疫抗体间接免疫荧光检测
• 核型荧光检测
• 胞浆型荧光检测
• 核仁型荧光检测
• 着丝点型荧光检测
• 荧光原位杂交探针验证检测
• 细胞骨架微管蛋白荧光定位检测
• 荧光微球免疫检测
• 植物组织免疫荧光定位检测
• 荧光免疫层析定量检测

检测标准（部分）

• GB/T 14926.52-2001 实验动物 免疫荧光试验
• GB/T 34740-2017 动物狂犬病直接免疫荧光诊断方法
• DB51/T 2308-2016 副猪嗜血杆菌间接免疫荧光检测方法
• DB37/T 3126-2018 禽波氏杆菌免疫荧光检测技术规范
• GB/T 17999.10-2008 SPF鸡 微生物学监测 第10部分：SPF鸡 间接免疫荧光试验
• GB/T 17999.9-1999 SPF鸡　间接免疫荧光试验
• YY/T 1792-2021 荧光免疫层析分析仪
• DB43/T 1936-2020 黄曲霉毒素B1快速检测 超导量点免疫荧光法
• SN/T 1444-2004 大鼠流行性出血热间接免疫荧光试验
• YY/T 1304.1-2015 时间分辨荧光免疫检测系统　第1部分：半自动时间分辨荧光免疫分析仪
• DB51/T 2309-2016 基因A型和基因C型鸭甲肝病毒间接免疫荧光检测方法
• YY/T 1304.2-2015 时间分辨荧光免疫检测系统　第2部分：时间分辨荧光免疫分析定量测定试剂(盒)
• DB43/T 2347-2022 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 超导量点免疫荧光法
• JJF 2302-2025 时间分辨荧光免疫分析仪校准规范
• JJF 2202-2025 便携式荧光免疫分析仪校准规范
• DB32/T 2447-2013 马立克氏病病毒感染的间接免疫荧光诊断技术操作规程
• SN/T 3728-2013 进出口食品中空肠弯曲菌快速检测方法 量子点免疫荧光法
• YY/T 1533-2017 全自动时间分辨荧光免疫分析仪
• LS/T 6149-2024 粮油检验　谷物中黄曲霉毒素B1测定　超导量点免疫荧光快速定量法
• DB21/T 3879-2023 动物弓形虫病荧光免疫层析检测技术规程

检测信息

免疫荧光检测是一种将免疫学抗原抗体反应的特异性与荧光显微技术相结合的免疫标记检测技术，主要用于细胞、组织或体液样本中抗原或抗体的定位、定性及半定量分析，广泛应用于生物医学研究、诊断和药物开发领域。

该检测旨在通过荧光素标记的抗体与靶抗原特异性结合，在荧光显微镜下观察荧光信号分布，从而实现对目标分子的精准识别，涉及荧光探针选择、抗体效价测定、非特异性荧光消除等核心技术手段。

检测核心流程包括样本固定与透化、封闭处理、一抗孵育、荧光二抗孵育及封片观察，核心参数涵盖荧光强度、信噪比、抗体稀释度及荧光淬灭抑制率等。

免疫荧光检测项目

• 荧光强度测定，用于评估抗原表达量及抗体结合效率
• 信噪比计算，用于判定荧光信号的特异性与背景干扰程度
• 荧光淬灭时间测试，用于评估抗荧光淬灭剂的封片效果
• 抗体效价检测，用于确定良好抗体工作浓度以避免假阳性
• 非特异性荧光评估，用于判定封闭效果及结果可靠性
• 阳性细胞百分比计算，用于定量分析目标细胞群体比例
• 平均荧光强度统计，用于半定量比较不同组别抗原表达差异
• 荧光光谱扫描，用于验证荧光染料的激发与发射波长特性
• 共定位分析，用于判定两种蛋白在亚细胞结构中的空间分布关系
• 背景荧光值测定，用于设定阈值排除自发荧光干扰
• 染色均匀度评估，用于判定样本处理及抗体渗透的一致性
• 荧光保留率测试，用于评估封片后样本的长期保存稳定性
• 细胞形态完整度检查，用于确认固定透化处理未破坏细胞结构
• 激发波长准确性验证，用于确保荧光显微镜光源设置正确
• 发射滤光片匹配度测试，用于避免不同荧光通道间的串色
• 靶蛋白定位判定，用于确认目标蛋白在细胞核或细胞质的分布
• 交叉反应性测试，用于评估二抗与样本内源性组织的非特异性结合
• 荧光颗粒计数，用于基于荧光微球的免疫定量分析
• 临界值浓度测定，用于荧光免疫层析试剂的检出限判定
• 重复性偏差测试，用于评估同批次样本染色结果的一致性

常见问题

免疫荧光检测需要多长时间？

通常7-15个工作日。具体周期视样本类型、染色复杂程度及是否需多重标记而定，石蜡切片因需脱蜡水化处理，周期相对较长。

免疫荧光检测费用大概多少？

根据检测项目数量确定。基础单标染色与多重荧光染色、普通细胞样本与特殊组织切片的收费标准不同，具体依据送检样本数量及分析参数报价。

免疫荧光检测样本制备有哪些要求？

样本需保持抗原活性，组织样本建议新鲜取材后速冻或固定，细胞样本需控制爬片密度，避免过度生长导致荧光信号重叠，同时需提供一抗说明书以便优化孵育条件。

免疫荧光检测方法

• 直接免疫荧光法，将荧光素直接标记在特异性一抗上检测靶抗原
• 间接免疫荧光法，使用荧光素标记的二抗追踪一抗结合部位
• 补体免疫荧光法，利用荧光抗补体抗体显示抗原抗体复合物位置
• 双标记免疫荧光法，采用不同激发波长的荧光素同时检测两种抗原
• 三标记免疫荧光法，使用三色荧光染料实现三种靶分子的同步定位
• 时间分辨荧光免疫分析法，利用镧系元素荧光衰变时间长消除背景干扰
• 荧光酶免疫分析法，将酶催化底物生成荧光产物用于信号放大检测
• 流式荧光免疫法，结合流式细胞术对悬液细胞表面抗原进行荧光分选检测
• 荧光免疫层析法，利用荧光标记物在层析试纸条上的免疫反应进行定量分析
• 共聚焦激光扫描显微法，利用激光共聚焦显微镜获取样本高分辨率荧光断层图像

总结

免疫荧光检测是将抗原抗体特异性反应与荧光显微技术结合的免疫标记检测，覆盖细胞组织抗原定位、病原微生物鉴定及自身抗体检测等内容。中析研究所检测中心检测周期通常为7-15个工作日，报告可用于科研验证及项目验收。