小鼠胚胎细胞检测

检测方法

• 显微镜直接观察法：利用倒置相差显微镜对细胞形态、贴壁率及生长融合度进行定性判定。
• 台盼蓝排斥法：利用死细胞摄取染料的原理，通过血球计数板计算细胞存活率。
• CCK-8比色法：通过检测细胞线粒体脱氢酶还原试剂产生的吸光度，定量分析细胞增殖活力。
• PCR扩增法：提取细胞组DNA，针对小鼠特异性序列设计引物进行扩增鉴定。
• 流式细胞术：利用荧光标记抗体与细胞表面抗原结合，通过激光散射信号定量分析细胞亚群比例。
• 直接培养法：将细胞样本接种于琼脂平板及液体培养基中，观察是否有菌落生长以判定无菌状态。
• DNA荧光染色法：采用Hoechst 33258染料对细胞核DNA进行染色，荧光显微镜下观察支原体污染情况。
• 染色体G显带技术：将细胞阻滞于中期，经胰酶消化后吉姆萨染色，分析染色体数目与结构畸变。
• 酶联免疫吸附测定：定量检测细胞培养上清中特定细胞因子或病毒抗原的分泌水平。
• 免疫印迹法：通过SDS-PAGE电泳分离细胞总蛋白，转膜后利用特异性抗体检测目标蛋白表达量。
• 透射电子显微镜法：对细胞超薄切片进行观察，直观检测细胞超微结构及病毒颗粒存在情况。

常见问题

小鼠胚胎细胞检测需要多长时间？

通常7-15个工作日，具体周期视细胞培养周期及检测项目数量而定，如需进行核型分析或支原体长期培养法检测，周期可能延长至20个工作日。

小鼠胚胎细胞检测费用大概多少？

根据检测项目数量确定，基础的无菌及支原体检测费用较低，若涉及全组测序或深度表型分析，需根据实际测序深度及靶向引物数量核算具体费用。

小鼠胚胎细胞检测报告有什么用途？

可用于质量评估、项目验收，中析研究所检测中心出具的检测报告可用于科研课题申报、新药IND申报材料及细胞库入库质量控制。

小鼠胚胎细胞检测对送检样本有什么要求？

活细胞样本需以冻存管形式干冰运输，细胞数量需满足很低检测要求，通常不低于1×10^6个细胞，若为固定样本需使用多聚甲醛固定并注明固定时间。

检测信息

小鼠胚胎细胞检测是一种针对小鼠来源胚胎细胞进行生物学特性、安全性及功能评估的检测手段，广泛应用于生物医药研发、毒理学评价及干细胞研究领域。

该检测旨在确认细胞的种属来源、遗传稳定性、无菌状态及是否存在支原体等外源因子污染，主要采用细胞培养法、核酸扩增技术及流式细胞术进行定性定量分析。

检测流程涵盖样本接收、细胞复苏与传代培养、形态学观察、分子生物学鉴定以及数据统计分析，核心参数包括细胞活率、倍增时间、核型分析结果及特定标志物表达率。

小鼠胚胎细胞检测项目

• 细胞活性检测：用于判定样本中活细胞所占比例，评估细胞冻存复苏后的存活状态。
• 细胞增殖能力测试：通过生长曲线测定细胞倍增时间，反映细胞的生长状态与分裂潜能。
• 支原体筛查：检测细胞培养物是否感染支原体，避免外源微生物污染导致实验结果偏差。
• 细菌真菌无菌检查：验证细胞悬液及培养基中是否存在需氧菌、厌氧菌及真菌污染。
• 种属鉴定：通过PCR扩增特异性片段，确认送检细胞确为小鼠来源且无交叉污染。
• 染色体核型分析：观察细胞染色体数目及结构变异，判定细胞遗传稳定性。
• 细胞形态学观察：通过显微镜评估细胞贴壁情况、突起形态及是否有病变特征。
• 流式细胞术表型分析：检测特定表面标志物表达比例，确认细胞纯度及分化方向。
• 端粒酶活性检测：评估细胞永生化能力，常用于干细胞与肿瘤细胞系特性判定。
• 软琼脂克隆形成实验：检测细胞锚着独立性生长能力，用于判定细胞的致瘤性风险。
• 细胞凋亡检测：通过Annexin V染色定量分析早期及晚期凋亡细胞比例。
• 细胞周期分析：采用PI染色流式细胞术测定各分裂期细胞占比，评估增殖阻滞情况。
• 外源毒因子检测：排查送检细胞是否携带小鼠白血病病毒等潜在逆转录病毒污染。
• 同工酶分析：通过电泳迁移率比对乳酸脱氢酶同工酶图谱，辅助验证细胞种属来源。
• 标志表达量检测：采用RT-qPCR测定Oct4、Nanog等干性表达水平，评估多能性维持状态。
• 内毒素含量测定：通过鲎试剂法定量检测细胞裂解液中的内毒素水平，确保符合生物制品安全限值。
• 体外分化能力测试：将胚胎干细胞悬浮培养形成拟胚体，验证其向三胚层分化的潜能。
• DNA含量测定：量化细胞内DNA总量，用于细胞计数及倍性分析。
• 蛋白质表达图谱分析：采用Western Blot验证特定信号通路蛋白表达情况，确认细胞功能状态。
• 冻存复苏存活率测试：评估细胞在液氮冻存及复苏后的即刻存活率与功能恢复能力。

检测范围

• 原代小鼠胚胎成纤维细胞
• 永生化小鼠胚胎细胞系
• 小鼠胚胎干细胞
• 转小鼠胚胎细胞
• 敲除小鼠胚胎细胞
• 小鼠胚胎神经干细胞
• 小鼠胚胎心肌细胞
• 小鼠胚胎成骨细胞
• 小鼠胚胎肝细胞
• 小鼠胚胎肾细胞
• 小鼠胚胎上皮细胞
• 小鼠胚胎内皮细胞
• 小鼠胚胎肿瘤细胞模型
• 小鼠胚胎成肌细胞
• 小鼠胚胎胶质细胞
• 小鼠胚胎星形胶质细胞
• 小鼠胚胎少突胶质细胞
• 小鼠胚胎肺成纤维细胞
• 小鼠胚胎皮肤细胞
• 小鼠胚胎滋养层细胞
• 小鼠胚胎内胚层细胞
• 小鼠胚胎中胚层细胞

检测标准（部分）

• SN/T 2330-2009 化妆品胚胎和发育毒性的小鼠胚胎干细胞试验
• GB/T 35520-2017 化学品 胚胎毒性 胚胎干细胞试验
• GB 15193.8-2014 食品安全国家标准　小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验
• NY/T 1900-2010 畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范
• DB41/T 2708-2024 牛精液、卵细胞与胚胎生物安全评价技术规程
• SC/T 7016.6-2012 鱼类细胞系 第6部分:大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)
• YY/T 1465.4-2017 医疗器械免疫原性评价方法　第4部分：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验　半体内法
• T/CSSCR 002-2019 人胚胎干细胞
• ISO 24603:2022 Biotechnology — Biobanking — Requirements for human and mouse pluripotent stem cells
• YY/T 0127.17-2014 口腔医疗器械生物学评价　第17部分：小鼠淋巴瘤细胞(TK)基因突变试验
• YY/T 0870.3-2019 医疗器械遗传毒性试验　第3部分：用小鼠淋巴瘤细胞进行的TK基因突变试验
• DOXPUB 15-0005-SOP Production of a Master Cell Bank From a Murine Hybridoma Cell Line
• T/CALAS 86-2020 实验动物 小鼠巨细胞病毒PCR检测 方法
• T/SRA 003-2020 胚胎干细胞来源间充质干细胞制备及质量控制
• ASTM E2525-22 Standard Test Method for Evaluation of the Effect of Nanoparticulate Materials on the Formation of Mouse Granulocyte-Macrophage Colonies
• T/ZHYX 003-2025 灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞及体外培养操作规程
• KS J ISO 24603 생명공학기술 — 생물자원은행 운영 — 인간과 생쥐의 전분화능 줄기세포에 대한 요구사항
• KS J ISO 24603-2024 생명공학기술 — 생물자원은행 운영 — 인간과 생쥐의 전분화능 줄기세포에 대한 요구사항
• T/HPCIA 003-2023 化妆品舒缓功效 - 斑马鱼胚胎中性粒细胞测试方法
• YY/T 0870.3-2013 医疗器械遗传毒性试验　第3部分：用小鼠淋巴瘤细胞　进行的体外哺乳动物细胞基因突变试验

总结

小鼠胚胎细胞检测是评估各类小鼠胚胎细胞生物学特性、安全性与遗传稳定性的综合测试。中析研究所检测中心报告可用于项目验收及细胞库质控，周期为7-15个工作日。