蛋白免疫应印迹检测

蛋白免疫应印迹检测项目

• 蛋白提取纯度测定（判定标准：BCA法测定浓度，评估样本是否满足电泳上样要求）
• 蛋白上样量一致性（意义：确保各泳道总蛋白量相同以消除加样误差）
• SDS-PAGE凝胶电泳分离效果（意义：通过分子量Marker判定蛋白是否有效分离）
• 转膜效率评估（意义：通过丽春红染色判定蛋白是否完全转移到PVDF或NC膜上）
• 封闭效果测试（意义：判定脱脂奶粉或BSA是否有效降低非特异性背景信号）
• 一抗特异性验证（意义：确认抗体仅与目标蛋白结合，无非特异性交叉反应）
• 二抗效价测定（意义：评估酶标二抗的工作浓度以获得良好信噪比）
• 内参蛋白表达量检测（意义：通过检测GAPDH或Actin校正上样误差，保证定量准确性）
• 目的蛋白相对表达量分析（意义：通过灰度值比较计算实验组与对照组蛋白表达差异倍数）
• 磷酸化蛋白水平检测（意义：评估激酶活性及细胞信号通路激活状态）
• 蛋白分子量验证（意义：通过迁移率比对判定目标蛋白是否发生降解或修饰）
• 条带位置异常分析（意义：排查蛋白剪切、二聚体形成或翻译后修饰导致的条带偏移）
• 背景信号强度评估（意义：判定洗膜步骤是否充分及抗体浓度是否过高）
• 曝光时间优化（意义：确定良好成像时间以避免条带过曝或信号过弱）
• 灰度值线性范围验证（意义：确保测得的光密度值与蛋白浓度呈线性关系以保证定量准确）
• 膜重复性检测（意义：通过Strip洗脱后重新杂交，验证同一膜上不同蛋白检测的可靠性）
• 蛋白降解程度评估（意义：通过低分子量杂带比例判定样本保存和处理是否规范）
• 跨膜蛋白富集效果检测（意义：判定膜蛋白提取试剂是否有效富集目标跨膜蛋白）
• 翻译后修饰比例分析（意义：计算修饰蛋白占总蛋白的比例以反映蛋白功能状态）
• 多通道荧光信号串扰测试（意义：判定多色荧光免疫印迹中不同通道间是否存在光谱重叠干扰）

常见问题

蛋白免疫应印迹检测需要多长时间？

通常7-15个工作日。

蛋白免疫应印迹检测费用大概多少？

根据检测项目数量确定。

蛋白免疫应印迹检测报告有什么用途？

可用于质量评估、项目验收。中析检测中心

蛋白免疫应印迹检测对样本有哪些要求？

样本需保存在-80℃避免反复冻融，细胞样本需加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解，组织样本需在低温下匀浆以维持蛋白完整性。

检测信息

蛋白免疫应印迹检测是一种利用特异性抗体对固定在固相载体上的蛋白质进行定性或半定量分析的分子生物学检测技术，广泛应用于基础医学研究、生物制药研发和诊断标志物筛选领域。

该检测旨在通过抗原抗体特异性结合原理，从复杂蛋白混合物中分离并鉴定目标蛋白的表达水平及修饰状态，涉及凝胶电泳分离、转膜印迹及免疫化学发光等技术手段。

检测流程涵盖样本总蛋白提取、浓度测定、SDS-PAGE电泳分离、转膜固定、封闭非特异性位点、抗体孵育及化学发光成像等核心步骤，很终通过灰度分析得出目标蛋白相对表达量。

检测范围

• 细胞总蛋白免疫印迹检测
• 组织匀浆蛋白免疫印迹检测
• 血清样本蛋白免疫印迹检测
• 核蛋白提取物免疫印迹检测
• 膜蛋白提取物免疫印迹检测
• 线粒体蛋白免疫印迹检测
• 磷酸化蛋白免疫印迹检测
• 糖基化蛋白免疫印迹检测
• 泛素化蛋白免疫印迹检测
• 乙酰化蛋白免疫印迹检测
• 甲基化蛋白免疫印迹检测
• 分泌型蛋白免疫印迹检测
• 内参蛋白免疫印迹检测
• 目的蛋白相对定量分析
• 相当定量蛋白免疫印迹检测
• 荧光免疫印迹检测
• 化学发光免疫印迹检测
• 可见光免疫印迹检测
• 变性凝胶电泳免疫印迹检测
• 非变性凝胶电泳免疫印迹检测
• 双向电泳免疫印迹检测
• 微量样本蛋白免疫印迹检测

检测标准（部分）

• GB/T 40225-2021 肌动蛋白抗体的检测 免疫印迹法
• SN/T 2206.7-2010 化妆品微生物检测方法 第7部分：蛋白免疫印迹法检测疯牛病病原
• GB/T 38477-2020 基因表达的测定 蛋白印迹法
• YY/T 1514-2017 人类免疫缺陷病毒(1+2型)抗体检测试剂(盒)(免疫印迹法)
• WS/T 645.1-2026 临床常用免疫学检验项目参考区间第1部分：血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4
• YY/T 1820-2021 特异性抗核抗体IgG检测试剂盒(免疫印迹法)
• WS/T 645.1-2018 临床常用免疫学检验项目参考区间 第1部分:血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4
• WST 645.1-2018 临床常用免疫学检验项目参考区间第1部分：血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4
• WS/T 654.1-2018 临床常用免疫学检验项目参考区间 第1部分：血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4
• GB/T 21033-2025 饲料中免疫球蛋白IgG的测定 高效液相色谱法
• GB/T 5009.194-2003 保健食品中免疫球蛋白lgG的测定
• GB/T 40368-2021 植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定 酶联免疫吸附法
• GH/T 1315-2020 蜂蜜中酪蛋白的测定　酶联免疫法
• YY/T 1969-2025 微量白蛋白测定试剂盒(免疫比浊法)
• YY/T 1722-2020 前白蛋白测定试剂盒(免疫比浊法)
• YY/T 1528-2017 肌红蛋白测定试剂盒(免疫比浊法)
• SN/T 2416-2010 进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A检测方法 电泳和免疫印迹法
• SN/T 3132-2012 出口牛乳制品中牛免疫球蛋白G的测定 酶联免疫吸附法
• YY/T 1233-2024 心肌肌钙蛋白测定试剂盒(标记免疫分析法)
• YY/T 1790-2021 纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)

蛋白免疫应印迹检测方法

• BCA比色法测定蛋白浓度
• Bradford法测定蛋白浓度
• SDS-PAGE凝胶电泳分离法
• 非变性PAGE电泳分离法
• 半干转印迹法
• 湿转转印迹法
• 丽春红S染色法验证转膜效果
• 脱脂奶粉封闭法
• BSA封闭法
• 化学发光ECL底物显色法
• 荧光底物显色法
• 增强型化学发光ECL检测法
• ImageJ灰度值定量分析法
• Ponceau红染色总蛋白归一化定量法
• PVDF膜Strip洗脱重探针法

总结

蛋白免疫应印迹检测是用于鉴定特定目标蛋白表达水平及翻译后修饰状态的分子生物学分析检测，涵盖样本处理、电泳分离、转膜印迹及免疫化学发光等核心内容。中析检测中心检测报告可用于科研数据支撑及生物制药工艺验证。