蛋白表达检测

常见问题

蛋白表达检测检测需要多长时间？

通常7-15个工作日，具体时间取决于检测项目数量、样品类型及是否需要进行复杂的翻译后修饰分析，复杂定制化检测项目可能需要更长时间。

蛋白表达检测检测费用大概多少？

根据检测项目数量确定，基础的表达验证如免疫印迹费用较低，若涉及质谱序列鉴定、糖基化修饰分析或多项生物学活性测试，费用会相应增加。

蛋白表达检测检测报告有什么用途？

可用于质量评估、项目验收，也可作为生物医药研发阶段性成果的证明文件、新药申报材料中的工艺验证数据以及科研成果发表的支撑材料。

蛋白表达检测样品寄送有什么要求？

样品需根据物理形态选择合适保存方式，液态蛋白样品需添加蛋白酶抑制剂并干冰运输，细胞样品需液氮冻存，以防止目标蛋白在运输过程中发生降解。

蛋白表达检测检测项目

• 蛋白浓度测定：通过BCA或Bradford法确定样品总蛋白量，为后续等量上样提供基准。
• 相对分子量验证：比对电泳迁移率判断表达产物是否符合预期分子量大小。
• 目的蛋白表达丰度：评估单位体积或单位细胞数量中目标蛋白的相对含量。
• 蛋白纯度分析：检测目标蛋白占总蛋白的比例以判定表达产物的均一性。
• 可溶性表达比例分析：区分上清与沉淀中的蛋白量以评估重组蛋白的折叠状态。
• 内毒素含量检测：判定大肠杆菌表达系统的重组蛋白中致热原物质是否符合安全限值。
• 宿主细胞蛋白残留量：评估下游纯化工艺去除宿主杂蛋白的效率。
• 翻译后修饰位点鉴定：确认磷酸化、糖基化等修饰是否在表达系统中正确发生。
• 等电点测定：通过等电聚焦判断重组表达蛋白的电荷异质性。
• 蛋白二级结构分析：利用圆二色谱评估表达产物的折叠构象是否具有生物活性。
• 二硫键配对分析：确认含有半胱氨酸的表达蛋白分子内或分子间二硫键形成是否正确。
• 聚集体分析：检测表达蛋白在纯化或存放过程中是否形成多聚体或片段化。
• 抗体亲和力测定：验证表达产物与特异性抗体的结合活性以反映其构象完整性。
• 酶比活力测定：针对重组酶类表达产物，测定单位质量蛋白的催化活性。
• 热稳定性分析：评估表达蛋白在不同温度下的构象维持能力。
• pH稳定性检测：判定表达蛋白在不同酸碱环境下的溶解度与稳定性。
• 降解半衰期分析：模拟生理环境测定表达蛋白被蛋白酶降解的速率。
• 细胞结合活性检测：通过流式细胞术评估膜蛋白或受体蛋白与靶细胞的结合能力。
• 标签去除效率验证：检测经酶切切除融合标签后目的蛋白的纯度及完整性。
• 批次表达一致性评价：比较不同批次表达产物的理化性质及生物学活性以验证工艺稳定性。

检测信息

蛋白表达检测是一种通过生物学和生物化学技术手段对特定细胞或组织中目标蛋白的合成水平、存在状态及表达丰度进行定性或定量分析的技术，广泛应用于生物医药研发、疾病标志物筛选、工程产物鉴定等领域。

该检测的主要目的是验证目标在宿主系统中的翻译效率，评估重组蛋白的可溶性及稳定性，涉及的技术手段涵盖免疫印迹、酶联免疫吸附测定、质谱分析及流式细胞术等。

检测流程通常包括样品制备、蛋白提取与定量、电泳分离、转膜与抗体孵育或质谱进样分析，核心参数涵盖蛋白浓度测定值、相对表达量灰度比值及同位素标记丰度比等。

检测范围

• 大肠杆菌重组表达蛋白
• 哺乳动物细胞表达蛋白
• 酵母表达重组蛋白
• 昆虫细胞杆状病毒表达蛋白
• 植物源重组表达蛋白
• 融合标签蛋白（如His-tag、GST-tag）
• 分泌型表达蛋白
• 胞内可溶性表达蛋白
• 包涵体表达蛋白
• 膜蛋白表达产物
• 磷酸化修饰蛋白
• 糖基化修饰蛋白
• 泛素化修饰蛋白
• 细胞因子表达蛋白
• 单克隆抗体表达产物
• 多克隆抗体表达产物
• 疫苗候选抗原蛋白
• 酶类重组表达蛋白
• 受体类表达蛋白
• 转录因子表达蛋白
• 肿瘤标志物表达蛋白
• 宿主细胞残留蛋白

检测标准（部分）

• GB/T 38477-2020 基因表达的测定 蛋白印迹法
• DB22/T 2987-2019 抗虫玉米Bt蛋白表达量检测技术规范
• 农业农村部公告第864号-8-2024 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆外源蛋白表达量检测技术规范
• 农业农村部公告第628号-7-2022 转基因植物及其产品成分检测 抗虫转Bt基因棉花外源 Bt蛋白表达量 ELISA检测方法
• 农业农村部公告第864号-7-2024 转基因植物及其产品成分检测 抗虫、耐除草剂玉米外源蛋白表达量检测技术规范
• 农业部1485号公告-17-2010 转基因生物及其产品食用安全检测 外源基因异源表达蛋白质等同性分析导则
• T/SDSZC 050-2025 尿酸盐转运蛋白1表达抑制物的筛选方法
• T/ZHCA 015-2022 化妆品紧致功效评价 斑马鱼幼鱼弹性蛋白基因相对表达量法
• 农业部1943号公告-4-2013 转基因植物及其产品成分检测 抗虫转Bt基因棉花外源蛋白表达量检测技术规范
• 农业部1485号公告-14-2010 转基因植物及其产品成分检测抗虫转Bt基因棉花外源蛋白表达量检测技术规范
• T/SHZSAQS 00331-2024 小鼠MSTN重组原核蛋白高效表达及纯化技术规程
• GB/T 24355-2023 地理信息 图示表达
• GB/T 46687.3-2026 标准机器语言表达 第3部分：特征要素表达方法
• GB/T 46687.1-2025 标准机器语言表达 第1部分：基本架构与要素表达通用要求
• LS/T 1815-2018 粮食电子地图　图示表达
• QB/T 8207-2026 海藻蛋白
• QB/T 5950-2023 酵母蛋白
• WS/T 464-2015 食物成分数据表达规范
• GB/T 24355-2009 地理信息　图示表达
• DB41/T 1040-2015 甲醇蛋白

检测方法

• SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据蛋白分子量差异分离表达产物并初步评估纯度。
• Western Blot免疫印迹法：利用特异性抗体靶向识别目标蛋白以验证其表达及分子量。
• ELISA酶联免疫吸附测定：通过抗原抗体反应对分泌型表达蛋白进行高灵敏度定量分析。
• 质谱分析法：利用液相色谱-串联质谱进行蛋白序列覆盖度及翻译后修饰位点的精准鉴定。
• BCA法蛋白浓度测定：基于二喹啉甲酸在碱性环境下与蛋白结合的显色反应进行总蛋白定量。
• 流式细胞术：通过荧光标记抗体检测细胞表面或胞内表达蛋白的阳性率及平均荧光强度。
• 免疫荧光技术：利用荧光显微镜定位目标蛋白在细胞内的亚细胞分布及表达状态。
• 表面等离子共振技术：实时监测表达蛋白与配体结合的动力学参数以评估其活性。
• 等电聚焦电泳：根据蛋白等电点差异分离表达产物以分析其电荷异质性。
• 圆二色谱法：通过测量蛋白对左旋和右旋圆偏振光的吸收差值分析其二级结构。
• 高效液相色谱法：利用体积排阻或反相色谱分离并定量分析蛋白聚集体和片段。

总结

蛋白表达检测是对重组蛋白浓度、纯度及修饰状态进行定性定量分析的服务。中析研究所检测中心旗下实验室拥有CMA、CNAS、ISO等检验检测资质。报告可用于研发质量评估及项目验收。